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公司動(dòng)態(tài)
表達(dá)β-半乳糖苷酶噬菌體的噬菌斑分析
點(diǎn)擊次數(shù)：1053 發(fā)布時(shí)間：2010-4-26
材料：
LB或NZCYM頂層瓊脂或瓊脂糖，含有X-gal
對(duì)于3ml頂層瓊脂，加40ul 2%X-gal。X-gal要在臨用前才加入已冷卻的頂層瓊脂（47℃）中。
大腸桿菌鋪平板細(xì)菌
只有不是β-半乳糖苷酶的過(guò)量表達(dá)株，可采用任何支持特異性λ噬菌體裂解生長(zhǎng)的大腸桿菌。細(xì)菌染色體上單拷貝lacZ基因的存在不影響噬菌斑的檢測(cè)。
方法：
1. 將λ噬菌體原種于SM+明膠液稀釋。
2. 用10ul適當(dāng)稀釋的λ噬菌體感染0.1ml鋪平板細(xì)菌。感染培養(yǎng)物37℃溫育20min。
3. 用3ml含X-gal的已熔頂層瓊脂（47℃）至*個(gè)試管，通過(guò)輕拍或輕微渦旋振蕩混勻，隨后倒入至瓊脂平板上。
4. 用剩下的噬菌體原種的稀釋液重復(fù)步驟3.
5. 當(dāng)頂層瓊脂凝固后，將平板于37℃倒置培養(yǎng)15-18h。
6. 將平板哦成那個(gè)37℃培養(yǎng)箱中取出，再于室溫下放置2h，然后記錄噬菌斑的顏色。