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免疫組化ABC法步驟
點擊次數：2225 發布時間：2009-2-9
1、4%多聚甲醛常規灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；
2、加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml+0.01MKPBS 100ml+30%過氧化氫）30min，以消除內源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；
3、加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100+0.01MKPBS 100ml）30min，以增加細胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
4、加入用血清稀釋液（牛血清白蛋白1.00g+0.01MPBS 100ml+疊氮納0.08g）稀釋的一抗，4℃存放24-48h；吸去抗體，0.01MKPBS洗5min×3；
5、加入0.01MKPBS稀釋的的二抗，室溫孵育2h。0.01MKPBS洗5min×3；
6、加入ABC復合物之類的抗體，室溫孵育2h，0.01MKPBS洗5min×3；蒸餾水迅速沖三次；
7、加入顯色液，進行免疫組織化學顯色，時間一般不超過30min，可不時在顯微鏡下進行觀察，待細胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液，用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01MKPBS終止反應；
8、梯度酒精脫水之后，封片，拍照。