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技術文章
常用溶液的配制
點擊次數：2057 發布時間：2009-10-19
一、常規溶液
（一）1/15mol/L PBS（磷酸緩沖液Phosphate Buffer Solution，PBS）
甲液：1/15mol/L Na2HPO4溶液
Na2HPO4 9.465g
蒸餾水 加至1000ml
乙液：l/15mol/L KH2PO4溶液
KH2P04 9.07g
蒸餾水 加至1000m1
分裝在棕色瓶內，于4℃冰箱中保存，用時甲、乙兩液各按不同比例混合，即可得所需pH的緩沖液,見下表:
| pH | 甲液ml | 乙液mI | pH | 甲液ml | 乙液mI |
| 5.29 5.59 5.91 6.24 6.47 6.64 | 2.5 5.0 10.0 20.0 30.0 40.0 | 97.5 95.0 90.0 80.0 70.0 60.0 | 6.81 6.98 7.17 7.38 7.73 8.04 | 50.0 60.0 70.0 80.0 90.0 95.0 | 50.0 40.0 30.0 20.0 10.0 5.0 |
（二）0.3％臺盼蘭染液
稱取臺盼蘭（Trypan blue）粉0.3克，溶于100ml生理鹽水中，加熱使之*溶解，用濾紙過濾除渣，裝入瓶內室溫保存。
（三）0.5％酚紅指示劑
酚紅 0.5g
0.1N（0.4％）NaOH 15ml
雙蒸水 85ml
將0.5克酚紅置研缽中，緩漫滴加0.1NNaOH溶液邊加邊磨，并不斷吸出已溶解的酚紅液，直至全部溶解，然后加入85ml雙蒸水，顏色為深紅，經粗濾紙過濾后使用，室溫保存。
（四）5.6％NaHCO3溶液
稱NaHCO35.6克，溶于100ml蒸餾水中，室溫保存即可（如需要也可10磅15分鐘高壓滅菌，4℃冰箱保存）
（五）10μg／ml秋水仙素
秋水仙素 lOmg
生理鹽水 100ml
裝入茶色瓶中，為貯備液，4℃冰箱中保存。甩時取貯備液1ml加生理鹽水9ml即可。
（六）0.4％KCl-0.4％檸檬酸鈉低滲液
將0.4％KCl和0.4％檸檬酸鈉兩液等量混合即可，室溫保存。
（七）2％檸檬酸鈉
稱取檸檬酸鈉2克，加100ml雙蒸水即可，室溫保存。
（八）0.2％次甲基蘭染液
稱次甲基蘭（Methylene blue）0.2克，加蒸餾水100ml，室溫保存。
（九）0.5％醋酸洋紅（Aceio Carmine）染液
洋紅 lg
醋酸 90ml
蒸餾水 110ml
將90ml醋酸加入110ml蒸餾水煮沸，然后將火焰移去，立即加入1克洋紅，使之迅速冷卻過濾，加飽和氫氧化鐵（媒染劑）水溶液數滴，直到呈葡萄酒色。室溫保存。加鐵使洋紅沉淀于組織而著色。此染液室溫存放時間越長效果越好，室溫保存。
（十）1％甲苯胺蘭（Toluidine blue）
稱取甲苯胺蘭1克，加蒸餾水lOOml。
（十一）1/3000中性紅染液
取中性紅（Neutral red）0.1克，加蒸餾水300ml。室溫保存。
（十二）Giemsa染液
1．貯備液
Giemsa粉 1g
純甘油 66ml
甲醇 66ml
先將Giemsa粉置于研缽中加少量甘油，充分研磨，呈無顆粒的糊狀。再將全部甘油加入，放入56℃溫箱中2小時，然后加入甲醇，保存于茶色瓶中。一般兩周后使用為好。
2．工作液
臨用時將貯備液與pH6.8的磷酸緩沖液按照1:20混合。
（十三）埃利希（Ehrlich）蘇木精染液
蘇木精 1.0g
乙醇 50ml
醋酸 5ml
甘油 50ml
硫酸鋁鉀 5g
蒸餾水 50ml
將蘇木精溶于少量的乙醇中，再加醋酸并攪拌，以加速其溶解。當蘇木精溶解后將甘油加入并搖動容器，同時加入其余的乙醇；硫酸鋁鉀需研磨并加熱，然后溶解于蒸餾水中，將其一滴滴地加入上邊的溶液，并不斷搖動，此液配好后，將瓶口用紗布蓋好，置通風處，經常搖動以加速其成熟，成熟約需4周左右，成熟的染液為深紅色。
二、細胞化學和細胞組分分離溶液
（一）M一緩沖液
瞇唑（Imidazole） 3.404g
KCI 3.7g
MgCl2·6H2O 101.65mg
ECTA 380.35mg
EDTA 29.224mg
巰基乙醇 0.07ml
甘油 297ml
蒸餾水 加至1000ml
用lNHCl調pH至7.2室溫保存。
（二）2％Triton X一100溶液
量取2mlTriton X一100（聚乙二醇辛基苯基醚）液，加M緩沖液98ml即可。
（三）0.2％考馬斯亮蘭R-250染液
甲醇 46.5ml
醋酸 7.0ml
考馬斯亮蘭 0.2g
蒸餾水 加至100ml
（四）A．0.1％堿性固綠染液（pH8.0～8.5）
1．0.1％固綠水溶液
固綠（Fast green） 0.1g
蒸餾水 100ml
2．0.05％Na2C03溶液
Na2C03 50mg
蒸餾水 100ml
用時按1:1體積混合即可。
B．0.1％酸性固綠染液（pH2.2）
1．0.1％固綠水溶液。
2．mol／L×75鹽酸液
鹽酸（比重1.19）0.109ml加蒸餾水至100ml
用時按l:1混合。
（五）甲基綠一哌咯寧染液
1.1mol／L醋酸緩沖液（pH4.8）：
（1）醋酸 17ml
蒸餾水 加至200ml
（2）醋酸水 13.5g
蒸餾水 加至lOOml
用時分別取兩液40ml、60ml混勻即可。
2．甲基綠一哌咯寧（methyl green—Pyrcnln）
5％哌咯寧水溶液 6ml
2％甲基綠水溶液 6ml
蒸餾水 16ml
lmol/L醋酸緩沖液 16ml
lmol/L醋酸緩沖液臨用時才可加入染液中。
（六）Schiff試劑
將堿性品紅0.5克加入lOOml沸水，持續煮沸5分鐘，并隨時攪拌，待冷卻到50℃時過濾到棕色瓶中，加1N HC11O毫升，冷卻至25℃時加入1克NaHSO3，此時需很好的振蕩，避光過夜。次日取出（呈淡黃色）加0.25克活性炭劇烈振蕩1分鐘。過濾后即得Schiff試劑。避光低溫保存。
（七）聯苯胺混合液
聯苯胺（4.4 Diamino benzidine） 0.2g
95％乙醇 lOOml
3％過氧化氫 2滴
此液臨用時配制。
（八）l％番紅水溶液
番紅（Safranin） 1.0g
蒸餾水 100ml
（九）1％SDS（十二烷基硫酸鈉Sodium dodecyl sulfate,SDS）
SDS 10g
45％乙醇 100ml
（十）1mol／LTris（三羥甲基氨基甲烷/鹽酸緩沖液Trihydroxy methylaminomethane Tris/HCL）pH7.8
Tris 12.114g
蒸餾水 lOOml
先將Tris溶于少量蒸餾水，用HCI調pH至7.8，然后加水至100ml
（十一）Ringer Solution
氯化鈉（冷血動物用0．65克） 0.9克
氯化鉀 0.042克
氯化鈣 0.025克
蒸餾水 100ml
（十二）淀粉肉湯培養基
蛋白 2g
淀粉 6g
牛肉湯 100ml
用10％NaHCO3調pH至7.0～7.2
（十三）0.25mol／L蔗糖一0.003mol／L氯化鈣溶液
蔗糖 85.5g
氯化鈣 0.33g
蒸餾水 1000ml
（十四）1％詹納斯綠B染液
取詹納斯綠（Janus green B）1.0g Ringer氏液100ml
（十五）1％剛果紅染液
剛果紅 1g
蒸餾水 100ml
（十六）Gomori*作用液
0.05mol／L醋酸緩沖液（pH5） lOOml
0.6醋酸加蒸餾水200ml、取其 42ml
醋酸鈉1.36g加蒸餾水200ml，取其158ml共200ml
B-甘油磷酸鈉 2g
醋酸鉛 2g
5％氯化鎂 5ml
以上作用液在臨用時配制，zui終在pH5～5.2，過濾使用。
（王世藩 匯編）
三、細胞培養和細胞融合溶液
（一）0.01mol／LPBS（磷酸鹽緩沖液Phosphate Buffer Saline，PBS）pH7.2。
0.2mol／L磷酸氫二鈉液（甲液）：
NaH2PO4·12H2O 35.814g
雙蒸水 加至500ml
0.2mol／L磷酸二氫鈉液（乙液）:
NaH2PO4·12H2O 15.601g
雙蒸水 加至500ml
取甲液36ml，乙液14ml和NaCl8.2克，加雙蒸水至1000ml。混勻待*溶解分裝，經高壓滅菌后保存于4℃冰箱備用。
（二）50％PEG（聚乙二醇Polyethyleneglycol mwl500）
稱取0.5克PEG，用前放入試管中在酒精燈火焰上熔化，加入等量37℃予熱的MEM培養液，混勻，保溫在37℃水浴中待用。
（三）MEM培養液（含10％小牛血清）
MEM培養液（日本制藥株式會社） 9.4g
雙蒸水 1000ml
NaHCO3 1.5g
谷氨酰胺（L-glutamin） 0.292g
56℃滅活30分鐘的小牛血清110ml
MEM粉末加水溶解后，用NaHCO3調pH到7.1（因在抽濾過程中pH升高0.2～0.3），然后加滅活的小牛血清和谷氨酰胺，待*溶解后，立即用G6抽濾除菌，分裝，置4℃冰箱保存備用。
（四）0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA混合消化液
胰蛋白酶（Trypsin）粉 0.25g
EDTA粉 20.0mg
0.01mol／L PBS 100ml
先用少量PBS溶解胰蛋白酶，然后將EDTA粉末和剩下的液體加入混合，置37℃水浴中1小時左右（待*溶解，液體呈透明為止），用G5抽濾，分裝置4℃冰箱中保存。
（五）Hanks液
1．原液甲
NaCl 160g
KCl 8g
MgSO4·7H2O 2g
MgCI2·6H2O 2g
溶于800ml餾水中。
CaCl2（無水） 2.8g
溶于100ml蒸餾水中。
將兩種液體混合后，加水至1000ml用濾紙濾過，再加2ml氯仿防腐，置4℃冰箱備用。
原液乙
Na2HPO4·12H2O 3.04g
KH2PO4 1.2g
葡萄糖 20.0g
溶于800ml蒸餾水中，用濾紙過濾，然后加0.5％酚紅80ml，再加水至1000ml，zui后加入2ml氯仿防腐，置4℃冰箱備用。
2．使用液
甲乙兩液各1份，雙蒸水18份，混勻分裝包扎好瓶口，經10磅15分鐘高壓滅菌后置4℃冰箱中保存。使用時用5.6％NaHCO3調pH值到所需要求。
（六）1640培養液（含lO％小牛血清）
RPMI-1640粉 10.39g
雙蒸水 加至1000ml
通入適量的C02氣體，邊通入CO2邊慢慢攪拌，使其（呈透明）*溶解。用NaHCO31.5克調pH值到7.2。
雙抗1萬u/ml 10ml
滅活小牛血清 110ml
混勻上述液體，立即用G6抽濾除菌分裝，置4℃冰箱備用。
（七）青、鏈霉素溶液
青霉素鈉鹽（40萬u／瓶） 5瓶
鏈霉素（100萬u／瓶） 2瓶
將兩者溶于200ml0.9％的無菌生理鹽水，分裝小瓶，-30℃保存。雙抗在培養基中的終濃度為各lOOu為宜。
（八）二甲基亞砜誘導HL-60細胞分化使用的終濃度為1。4％。
（九）BrdU溶液（200ug/m1）
用無菌青霉素瓶，在室溫下稱取1.0mg，在無菌條件下加入滅菌生理鹽水9.0ml，溶解，混勻，用黑紙包嚴，避光置冰箱冰格中保存。用時現配。
（十）2×SSC溶液
用分析天平稱取氯化鈉17.53克，檸檬酸鈉8.82克溶于蒸餾水中，加蒸餾水至1000毫升。
（十一）3％瓊脂：
取瓊脂粉3克，加入雙蒸水到100毫升，攪勻，高壓消毒后（15磅20分鐘），冷藏備用，使用前重新加熱煮沸（貯存時間不宜過長）。
四、制備電鏡標本的溶液
（一）2.5％戊二醛溶液
25％戊二醛 lOml
0.1mol／L二甲砷酸鈉緩沖液
裝入茶色瓶中，保存于4℃冰箱備用。
（二）0.1mol／L二甲砷酸鈉緩沖液
二甲砷酸鈉 10.70g
蒸餾水 500ml
將二甲砷酸鈉置于500ml容量瓶中，先加水約400ml，震蕩使其溶解，用HCl調pH到7.4，加入剩余蒸餾水，4℃冰箱保存。
（三）包埋劑
環氧樹脂Epon812 56.30g
DDSA（十二烷基琥珀酸酐Dodecenyl succinic
anhydride，DDSA） 14.60g
MNA（甲基內次甲基鄰苯二甲酸酐Methyl Nadic）
anhydride，MNA 29.00g
混合上述三種包埋劑成分，攪拌30分鐘使其充分混勻。再加加速劑2,4,6一三（二甲氨基甲基）苯酚（2，4，6-tridimethyl aminomethylphenol，DMP-30）1.5ml，繼續攪拌30分鐘，置于干燥罐中（室溫）備用。
（四）2％單寧酸
單寧酸 2g
雙蒸水 100ml
溶解后過濾裝茶色瓶中，4℃冰箱保存。
（五）高錳酸鉀固定劑
檸檬酸三鈉 60mmol/L
氯化鉀 25mmol/L
氯化鎂 35mmol/L
高錳酸鉀 125mmol/L
pH為7.4-7.8，裝茶色瓶中，4℃冰箱中保存，有效期2個月左右。
（六）1％OsO4溶液
OsO4 0.5g
0.1mol/L二甲砷酸鈉緩沖液。 50ml
OsO4一般為0.5或1克安瓶中封閉包裝，配制時剝去商標，用自來水洗凈，放洗滌液中泡4～12小時后用水沖洗，在安瓶上劃痕，用蒸餾水洗凈，投入茶色瓶中，加緩沖液，用玻璃棒在瓶中搗碎，輕輕搖動放冰箱中，48小時后*溶解。此藥蒸氣對人眼、角膜、鼻腔和口腔粘膜有固定作用，用時特別小心，在通風櫥內操作。
五、顯影、定影溶液
（一）D-72顯影液
溫水（52℃） 750ml
米吐爾 3g
無水亞硫酸鈉 45g
對苯二酚 12g
無水碳酸鈉 67.5g
溴化鉀 19g
水 加至1000ml
D-72顯影液為通用顯影液，既能顯影膠片又能用于相紙顯影。
使用原液，20℃顯影時間1～2分鐘可得高反差。
加水1:2稀釋后使用可得較低反差。1:1稀釋使用。20℃時顯影時間3～4分鐘可得正常反差。
（二）SB-1停顯液配方
水 1000ml
28％醋酸 48ml
停顯時間lO秒左右。
（三）F-5酸性堅膜定影液
水 750ml
硫代硫酸鈉 240g
無水亞硫酸鈉 15g
28％醋酸 48ml
硼酸 7.5g
鉀礬 15g
水 1000ml
定影時，藥液溫度應保持在18~20℃定影時間10~15分鐘。
配藥原則
配制時先取容量3/4的清水，水溫50℃左右，按配方的順序，把稱好的藥逐一加入，只有前一藥品溶解后，方可放入第二種藥品，并繼續溶解下去，zui后將清水加至全量。
配完后要經12小時，待各種藥品充分作用后才能使用。
上述各種溶液配制好后，勻應貼瓶簽，注明名稱，濃度及配制日期，并按規定方法保存，用前檢查有無變質或污染現象后，方可使用。