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《食用菌中凝集素的測定 高效液相色譜法》國家標準征求意見

2021-10-15 08:46:44 來源：儀表網 閱讀量：7733

　　根據國家標準化管理委員會國家標準制修訂計劃，由中國標準化研究院提出并歸口的《食用菌中凝集素的測定 高效液相色譜法》(計劃號：20202637-T-424)國家標準現已形成征求意見稿，按照《國家標準管理辦法》的有關規定，現向社會各界公開征求意見。
 
　　目前，食用菌是一種富含多種活性成分的優良蔬菜，我國是世界食用菌生產第一大國，目前食用菌產量占全球總產量的75%以上，2014年，全國食用菌產量已超過3000萬噸。食用菌產品出口126個國家和地區，食用菌出口量約占亞洲出口總量的80%，占全球貿易量的40%。食用菌總產值在我國種植業中的排名，僅次于糧、棉、油、菜、果，居第六位。食用菌產業已成為我國種植業的一項新興的支柱產業和新的經濟增長點。其中2011年，我國食用菌產值已超過1400億元，出口創匯達24.07億美元。
 
　　食用菌產品主要以鮮銷、干制、鹽漬、速凍等方式為主，在其加工生產過程中會產生大量的廢棄物，主要有菌腳、菇片、菌柄基部等。這些廢棄物難以食用或商品價值低，開發利用率極低，多限于在動物飼料和有機肥中使用，因此對食用菌加工廢棄物中的主要活性成分進行深入研究，制定相應的標準是企業快速發展和進行產品質量控制的需要。
 
　　凝集素的檢測方法在國內外還沒有統一標準，因此急需建立一套科學合理的凝集素檢測體系，為凝集素產品研發及食用菌綜合開發利用提供依據，進而引導生產，規范市場。所以，本標準的制定也是完善食用菌及其加工產品檢測方法國家標準的需要。
 
　　高效液相色譜(HPLC)是目前能夠快速分析凝集素的重要技術手段，可以結合超濾、離子交換層析、分子排阻層析以及親和層析等技術，從而獲得高純度的凝集素，提高了純化的效率。
 
　　本標準規定了基于高效液相色譜法的食用菌中凝集素的測定方法的范圍、規范性引用文件、原理、試劑和材料、儀器和設備、食用菌中凝集素的測定方法、結果計算與表示、精密度。
 
　　本標準的主體內容包括：范圍、規范性引用文件、原理、試劑、儀器和設備、測定步驟、空白試驗、結果計算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗報告等。
 
　　方法原理：
 
　　試樣中菌菇凝集素經硫酸銨沉淀、超濾富集后，高效液相色譜法測定，以保留時間定性，外標法定量。
 
　　儀器和設備：
 
　　1.高效液相色譜儀：配紫外檢測器。2.超聲波振蕩器。3.分析天平，感量 0.01g 和 0.0001g。4.離心機，5000 r/min 以上。5. 破壁機。6.超濾離心管：50 mL，10 kd。7.容量瓶：5 mL。8.燒杯：50 mL，500 mL。9.凝膠色譜柱，TSKgel G2000SWXL，7.8 mm I.D.×30 cm，5 μm，或相當規格色譜柱。10.針式微孔過濾器：0.22 um，直徑 13 mm 的聚四氟乙烯(PTFE)濾膜或者相當者。11.離心管：50 mL。
 
　　凝集素提取：
 
　　鮮樣：
 
　　取處理好的鮮樣 50 g 于破壁機中，加入 1:30 的磷酸鹽提取液勻漿，勻漿完成后放入 500 mL 燒杯中，在超聲波振蕩器中超聲 30 min，超聲完成后在 4℃冰箱中放置 4 h。放置混勻后稱取 20 g 勻漿以 8000r/min 的轉速離心 20 min，離心完成后用濾紙過濾，取過濾后的濾液 5 g 放入燒杯中，加入 5 g 30%的硫酸銨溶液，并用超濾離心管以 8000 r/min 的轉速離心 15 min 超濾 6 次，將超濾之后的上清液轉入 5 mL容量瓶中，用水定容，過 0.22 um 的水系針式濾膜，以供液相檢測使用。
 
　　干樣：
 
　　取處理好的干樣1 g于燒杯中，加入1:45的磷酸鹽提取液在超聲波振蕩器中超聲30 min，超聲完成后在4℃冰箱放置 4h。放置混勻后稱取20 g以8000 r/min的轉速離心20 min，離心完成后用濾紙過濾，取過濾后的濾液 2g放入燒杯中，加入10 g 30%的硫酸銨溶液，并用超濾離心管以8000 r/min的轉速離心15 min超濾6次，將超濾之后的上清液轉入5毫升容量瓶中，用水定容，過0.22 μm的水系針式濾膜，以供液相檢測使用。
 
　　本標準適用于食用菌中凝集素的測定。
 

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