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《植物提取物抗氧化活性評價 薄層色譜法》國家標準征求意見

2021-10-13 08:46:33 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：7934

　　根據(jù)國家標準化管理委員會國家標準制修訂計劃，由中國標準化研究院提出并歸口的《植物提取物抗氧化活性評價 薄層色譜法》(計劃號：20205075-T-424)國家標準現(xiàn)已形成征求意見稿，按照《國家標準管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)向社會各界公開征求意見。
 
　　抗氧化是抗衰老、抗疲勞、抗炎等生物活性的重要基礎(chǔ)。絕大部分以植物提取物為原料的功能食品都含有大量抗氧化活物質(zhì)，例如蘆丁、槲皮素、花青素、茶多酚等。目前，我國生產(chǎn)具有抗氧化功能產(chǎn)品(藥品、食品和保健品等)的規(guī)模以上企業(yè)多達2000多家，已經(jīng)形成了2300多億元的產(chǎn)業(yè)規(guī)模。這些產(chǎn)品的原料大部分來自農(nóng)業(yè)廢棄物。
 
　　目前，植物提取物中抗氧化活性評價方法主要根據(jù)受試對象分為體內(nèi)和體外二大類。體內(nèi)方法以丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱苷肽等為指標，測定其含量來評價體內(nèi)抗氧化活性的高低。體外抗氧化評價體系則以自由基清除法、氧化還原法為主。但必須注意的是，這種抗氧化評價方法有一個固有的缺點：檢測選擇性差。更確切地說，當(dāng)樣品中含有兩種或者兩種以上的抗氧化活性物質(zhì)的時候，分析結(jié)果無法區(qū)分每一種物質(zhì)的抗氧化活性高低。而基于實驗動物模型的抗氧化評價方法時間長、成本高且誤差大，因此難以形成國家標準。
 
　　薄層色譜是近年來廣泛應(yīng)用到植物提取物分析的一項色譜分離技術(shù)。建立在薄層色譜和 DPPH 顯色反應(yīng)聯(lián)用基礎(chǔ)上的抗氧化分析方法兼?zhèn)溥x擇性高和通用性好的優(yōu)點。更重要的是，薄層色譜是目前能與生化反應(yīng)直接聯(lián)用的色譜工具。
 
　　目前可查詢到的關(guān)于薄層色譜技術(shù)的國家標準有兩項：《配合飼料中 T-2毒素的測定 薄層色譜法》和《蜂蜜中高果糖淀粉糖漿測定方法 薄層色譜法》。未查到將薄層色譜與生物傳感聯(lián)合用于植物提取物中功效成分活性評估的國家標準、行業(yè)標準和地方標準。這一缺失，使得企業(yè)在利用植物廢棄物作為原料生產(chǎn)抗氧化功效產(chǎn)品及其質(zhì)量控制缺乏技術(shù)支撐，無標準可用。
 
　　因此，有必要盡快制定《植物提取物抗氧化活性評價 薄層色譜法》國家標準，以滿足相關(guān)企業(yè)生產(chǎn)和品控的需要。
 
　　本標準規(guī)定了薄層色譜聯(lián)用 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)顯色反應(yīng)評估植物提取物抗氧化能力的方法(以槐米提取物為例，蘆丁為標準)。
 
　　本標準的主體內(nèi)容包括：范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑、儀器和設(shè)備、測定步驟、空白試驗、結(jié)果計算與表示、精密度和回收率、檢出限、檢驗報告等。
 
　　方法原理：
 
　　用硅膠薄層色譜對槐米提取物的甲醇溶液進行展開，實現(xiàn)對其中多種抗氧化物質(zhì)的色譜分離，然后通過浸漬的方式將停留在硅膠薄層上的分離結(jié)果與 DPPH 顯色反應(yīng)相耦合，顯色反應(yīng)結(jié)果用光密度掃描儀定量檢測，檢測結(jié)果以蘆丁為內(nèi)標加權(quán)定量計算評估槐米樣品綜合抗氧化能力。
 
　　儀器與設(shè)備：
 
　　1.實驗室常用玻璃器皿。2.分析天平：靈敏度0.0001g。3.渦旋混勻器。4.超聲清洗儀：超聲頻率 40～80 kHz。5.離心機：轉(zhuǎn)速≥4000 rpm。6.雙光束紫外-可見光分光光度計：檢測范圍 190-900 nm。7.薄層色譜工作站，包括：薄層點樣儀、薄層展開儀、自動浸漬器、光密度掃描儀。
 
　　檢測限和定量限：
 
　　使用合適濃度的蘆丁標準溶液，逐漸減少點樣量，進行薄層色譜-DPPH 顯色反應(yīng)，根據(jù)光密度掃描結(jié)果計算峰高與基線噪音高的比，S/N=3(S 為對照品峰高，N 為基線噪音高)時的對照品濃度為檢出限(LOD)，得到蘆丁的檢測限12ng/斑點，S/N=10 時的濃度為定量限(LOQ)，得到蘆丁的定量限39ng/斑點。
 
　　精密度和準確度：
 
　　通過測定槐米提取物中蘆丁的添加回收率(分別進行了 3 個添加水平試驗，50，100，150 mg/g，每個添加水平重復(fù) 3 次)對優(yōu)化得到的分離-檢測方法的精確度和準確度進行驗證。表 1 所示，方法的添加回收率為 82%-97%，精密度RSD<10%。這表明本標準所使用的提取方法和分離檢測手段具有良好的準確度和精密度。
 
　　本標準適用于同時評價植物性食品原料中多元抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。
 

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